高速離心機分離植物細胞膜的方法

發布時間：

2015-05-13

概要：

這里你最好找個高速離心機，推薦選用H2050臺式高速大容量離心機，離心力如果不夠分離不出來，如果原料非常多的話可能會析出一些

化學實驗室離心機選用盧湘儀H2050臺式高速大容量離心機進行實驗。我給你一種用藥品比較少的。你結合自己的情況看一下。
另這種方法得到的質膜多數是微囊泡。
這種方法我們成功提取過擬南芥，玉米胚芽鞘，煙草懸浮細胞的質膜。
1，組織破碎，你可以用研本。如果存在大量粗纖維的話，你還可以用紗布過濾一下。
裂解液配方，0.55M 蔗糖；0.76M Tris; 0.02M EDTA; 0.03M 抗壞血酸。用Hcl 調整HP 到7.8。
原料/裂解液 1：2
2，研磨液分3次低速離心分離出那些不需要的組織殘渣或細胞器。 100G 10min ; 3000G 5min ; 17000G 15min。（速度不夠的話適當延長時間，否則懸浮液中會存在大量的線粒體之類的細胞器）。
3，上一步得到的懸浮液是含有總膜的懸浮液，一般情況下，下一步應該利用高速離心20000G以上的離心力，把所有的膜沉淀出來進一步純化（這里你最好找個高速離心機，推薦選用H2050臺式高速大容量離心機，離心力如果不夠分離不出來，如果原料非常多的話可能會析出一些，你也可以試著改變下裂解液的蔗糖濃度，理論上密度變了以后沉降系數也會改變，不過這個要做大量的計算工作以確保不影響膜的純度）。純化有PEG/Dextran; 蔗糖梯度兩種方法，蔗糖梯度比較老了，效果不是很好，但是蔗糖很便宜很好弄。我們用的是6.3%PEG/Dextran 。

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