它是原生質(zhì)體制備提取實(shí)驗(yàn)老搭檔

發(fā)布時(shí)間：

2021-11-24

概要：

原生質(zhì)體制備提取實(shí)驗(yàn)不能缺少老搭檔——離心機(jī)?。將酶解后的組織液過(guò)尼龍網(wǎng)膜，去除未充分消化的組織碎片，選擇與原生質(zhì)體等滲的buffer清洗原生質(zhì)體兩次，離心去除碎片（一般采取50-100 g，離心機(jī)離心1-2 min左右），最后將原生質(zhì)體重懸于適當(dāng)濃度甘露醇中。可參考以下方法來(lái)降低原生質(zhì)體懸液中的碎片占比

　　原生質(zhì)體制備提取實(shí)驗(yàn)不能缺少老搭檔——離心機(jī),它可以說(shuō)是原生質(zhì)體制備提取實(shí)驗(yàn)必備儀器了。

　　原生質(zhì)體制備提取作用有五點(diǎn)：

　　1.細(xì)胞融合。

　　2.原生質(zhì)體中進(jìn)行瞬時(shí)表達(dá)：亞細(xì)胞定位，蛋白和核酸相互作用。

　　3.利用膜片鉗技術(shù)研究離子通道及原生質(zhì)體在受光、脅迫和激素作用后的調(diào)節(jié)機(jī)制的研究。

　　4.細(xì)胞壁再生、細(xì)胞分裂與分化、攝入細(xì)胞器、病毒侵染機(jī)理、膜透性及離子轉(zhuǎn)運(yùn)等基礎(chǔ)理論研究的理想材料。

　　5.被用來(lái)作為研究植物細(xì)胞鈣信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及其調(diào)節(jié)機(jī)制的理想材料。

　　由此可見(jiàn)原生質(zhì)體純化的重要性。下面以植物為例，進(jìn)行簡(jiǎn)單講解:

　　纖維素酶和果膠酶能分解植物細(xì)胞壁，形成原生質(zhì)體；加入0．6mol/l甘露醇的目的是維持原生質(zhì)體正常的形態(tài)，防止原生質(zhì)體吸水脹破；不同植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)不同，則原生質(zhì)體結(jié)構(gòu)不同；原生質(zhì)體的結(jié)構(gòu)由細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核組成。

　　將酶解后的組織液過(guò)尼龍網(wǎng)膜，去除未充分消化的組織碎片，選擇與原生質(zhì)體等滲的buffer清洗原生質(zhì)體兩次，離心去除碎片（一般采取50-100 g，離心機(jī)離心1-2 min左右），最后將原生質(zhì)體重懸于適當(dāng)濃度甘露醇中。可參考以下方法來(lái)降低原生質(zhì)體懸液中的碎片占比：

　　1. 提前優(yōu)化樣本，比如剝?nèi)ネ馄ぃ▋H限于研究對(duì)象不包含外皮部分的樣本）、棄去質(zhì)地堅(jiān)硬的組織和損傷組織。

　　2. 降低離心機(jī)離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間，去除留在上清中的碎片。

　　3. 如果原生質(zhì)體起始量足夠大，可考慮通過(guò)流式分選去除碎片。

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